ACK 红细胞裂解液的操作流程

一、产品简介
ACK Lysis Buffer（氯化铵型红细胞裂解液），选择性裂解无核红细胞，保留白细胞、免疫细胞等有核细胞活性，常用于人 / 小鼠外周血、脾脏单细胞悬液去红，适配流式、原代细胞分离、核酸提取等实验。
配方（1×）：NH₄Cl、KHCO₃、EDTA，pH7.2~7.4；原理：氯化铵低渗渗透裂解红细胞，有核细胞耐受短时处理 ⚠️ 仅适用于哺乳类无核红细胞；鸟类、鱼、两栖类有核红细胞无法用 ACK 裂解
二、试剂与耗材准备
ACK Lysis Buffer（区分：1× 即用型 / 10× 浓缩型，浓缩液需无菌纯水稀释至 1× 再使用）
抗凝全血 / 组织单细胞悬液、预冷 PBS/HBSS/ 无血清培养基
低温离心机、15mL/50mL 离心管、移液枪、冰盒；细胞培养实验需超净台无菌操作
三、标准操作方案（人外周血，最常用）
1.加裂解液：取新鲜抗凝全血，加入3~10 倍体积 1×ACK 裂解液（常规推荐 1:5；红细胞富集样本可用 1:10），轻柔颠倒 / 吹打混匀，严禁剧烈涡旋损伤白细胞
2.孵育裂解：室温或冰上孵育 3–10 min 
小鼠血：3–5 min 即可
人外周血：5–10 min，严禁超过 15 min，过长会损伤目标有核细胞；期间可轻混匀 1~2 次，液体由浑浊转为透亮提示红细胞破裂
3.终止 + 收集细胞：裂解完成后，补加 PBS/HBSS 稀释终止；4℃，400–500 g，离心 5 min，缓慢吸弃红色上清（不要触碰细胞沉淀）
4.洗涤去除残留 ACK：沉淀加入预冷 PBS 重悬，400–500 g 离心 5 min，弃上清；洗涤 1~2 次，减少氯化铵残留干扰后续实验
5.二次裂解（可选）：沉淀仍明显发红，可重复裂解步骤一次；微量残留红细胞多数不影响流式、核酸实验
6.重悬待用：按实验需求用培养基、PBS 或裂解液重悬细胞沉淀，进入计数、流式、RNA 提取等下游实验
四、组织样本（脾脏 / 淋巴结单细胞悬液）简化流程
1.组织研磨过筛制备单细胞悬液，离心收细胞沉淀，弃上清
2.加入 3~5 倍体积 ACK 裂解液，冰上 3–5 min
3.PBS 终止，400–500 g 4℃离心 5 min，PBS 洗涤 1 次即可