PVDF膜转印膜要如何使用

PVDF膜即聚偏二氟乙/烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。
PVDF本质是一种疏水性的聚合物，在水溶液中不会浸湿，为了在水性缓冲液和系统中使用PVDF膜，首先必须将其浸泡在50%(v/v)或更高浓度的醇溶液中。
PVDF膜在使用时需预处理，用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。
甲醇、乙醇和异丙醇都适合浸泡这种膜。
随着膜的外观从不透明到半透明，完全浸湿是显而易见的。之后必须用水反复冲洗以去除醇类，经预处理的膜可以直接放入转印缓冲液中平衡。
一旦膜被浸湿，蛋白结合可通过蛋白与膜的接触而实现。
由于蛋白与膜的结合贯穿整个膜的厚度(深度)，结合能力是由孔的内部表面积来决定的，随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。
0.2um PVDF膜内部表面积大约是0.45um PVDF 膜的三倍，使其吸附能力更高。PVDF膜是疏水性的，一般大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜，小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜。