上海联硕生物科技有限公司
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人白介素6(IL-6 )试剂盒的原理和操作
人阅读 发布时间:2023-08-04 17:18
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中白介素6(IL-6 )的含量。
实验原理:
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被白介素6(IL-6 )捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素6(IL-6 )呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
操作步骤:
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔中加入待测样本40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。