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你了解胎牛血清吗?使用前是否需要热灭活?
人阅读 发布时间:2023-07-19 14:20
胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生24小时之内的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是品质最高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。
胎牛血清的功能:
胎牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必需的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。
1.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
5.起酸碱度缓冲液作用。
6.提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
一、血清灭活的目的是什么?
1、血清热灭活目的主要是为了去除血清中补体等对热敏感的物质,但是在胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要。
2、实验员曾对商业胎牛血清中的补体成分进行测定,他们发现胎牛血清中含有的 C1、C6 仅达成年动物血清的 1-3%,而其它补体成分仅有成年动物的 5-50%,至于补体的主要成分 C3 在胎牛血清中则几乎不能检出。通过补体固定实验,也未发现有明显的溶血现象。多数实验室在培养前将培养液进行预热的过程,也对热敏的补体有灭活的作用。
3、热灭活另一个目的是为了使支原体失活。
二、血清使用前是否都必须热灭活?
1、在免疫学研究、培养 ES 细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。而对于其他大多数的细胞来说是不需要热灭活血清的。
2、很多情况下,热灭活并不会改善细胞的生长,反而会降低了支持细胞生长的能力。即使在少数有促进的情况下,其促进的比率也是微不足道。另外,血清的热灭活导致的沉淀常常被认为是微生物污染,从而给用户带来不必要的麻烦。
3、我司建议,对血清进行灭活的用户,需要通过试验来证实其必要性。
三、血清热灭活应该怎么操作?
1、融化血清,并充分混匀其内容物。
2、对照瓶装等量水,插入温度计。
3、将血清瓶和对照瓶放入 56℃ 水浴箱。
4、当温度达到 56℃,立即开始计时。
5、每 5 分钟,旋转血清瓶一次,轻微规则摇晃,以使瓶中血清受热均匀一致。
6、56℃,30 分钟后,立刻去除血清。
注意事项:血清灭活时,避免接触到加热管,防止受热不均匀,导致灭活失败,血清灭活后,冷水浴冷却。
四、为什么血清灭活后产生大量沉淀?
1、血清灭活后出现的沉淀大多数是纤维蛋白析出,属正常现象。灭活过程多次摇晃使血清受热均匀可以降低蛋白的析出。
2、当血清在未完全化冻状态时直接置 56℃ 水浴、灭活过程中