上海联硕生物科技有限公司
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在细胞培养中,如何冻存细胞
人阅读 发布时间:2023-04-24 15:14
操作步骤:
1.用移液器吸走原培养基,加入适量PBS洗1-2遍;
2.加入适量胰酶,置于培养箱中消化;
3.待消化到位后加入适量血清或完全培养基终止消化,800-1000rpm离心3-5min;
4.配制冻存液,待细胞离心后去上清,加入冻存液重悬,转移到冻存管中;
5.将冻存管放入程序降温盒中,-80度过夜,然后转移到液氮中保存。
注意细节:
1.冻存步骤中包含了消化的大部分步骤,注意细节相同
2.冻存液常规配比为培养基:血清:DMSO=7:2:1,如果细胞比较珍贵,可以调整为血清:DMSO=9:1;
3.如果没有程序降温盒,可以将冻存细胞依次放于4度1h,-20度2h,-80过夜,大部分细胞也可以适应,但原代细胞不建议这么处理;
4.冻存细胞储存在-80度中通常不建议超过半年,液氮中通常不建议超过2年;
5.细胞如果是第一次养,建议至少冻存两个批次以上,以尽量避免因为冻存问题导致细胞绝种;