上海联硕生物科技有限公司
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CCK-8试剂盒的操作步骤
人阅读 发布时间:2023-03-08 13:43
CCK-8试剂盒,是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度,无放射性的比色检测法。
CCK法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性测验等。
操作步骤: 1、在96孔板中配置100μl的细胞悬液,将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃,5%CO2的条件下)。
2、向培养板加入10μl不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如6、12、24或48小时)。
4、向每孔加入10μlCCK-8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度,如无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。
7、如暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10μl0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下,在24小时内吸光度不会发生变化。
注意: 如果待测物质有氧化性或还原性,可以加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉影像。 当然影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基加入后的空白吸收即可。