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DMEM(低糖)的注意事项和使用步骤

人阅读 发布时间:2023-03-06 13:57

DMEM培养基是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基,是在MEM培养基的基础上研制的。
与MEM比较增加了各种成分的用量,同时又分为高糖型(低于4500gm/L)和低糖型(低于1000mg/L)。
DMEM低糖培养基用于养干细胞可防分化,DMEM高糖可养大多数哺乳动物的细胞。

注意事项:
1、培养及长期放置,需要2-8℃避光保存,请勿低温冻存。
2、培养基中添加的L-谷氨酰胺在溶液中不稳定、易分解,长期放置后使用若发现细胞生长变慢可以在使用前加入适量的L-谷氨酰胺,来维持细胞正常代谢。
3、含有NaHCO3的培养基开瓶次数较多后培养基内的CO2会逐渐溢出,PH值上升,培养基的颜色会偏紫色。
培养基偏碱性会造成细胞生长停滞或死亡,建议分装成小瓶使用或用HEPES调整至正常PH范围。

使用步骤:
1、准确称量试剂:根据不同菌类的用途,选择适宜的培养基,培养基所需试剂必须纯净。
2、校正PH值:将称量好的培养基各种成分放入容器内,标记划线、加热溶解、补充水分、测定酸碱度,常用PH6.8-8.0的精密试纸或酸度计测定。
用1NNaOH和1NHCI调节PH值到适宜范围内。
3、过滤:将玻璃漏斗置铁架上,再用DMEM低糖纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中,将上述培养基倒入其中过滤至透明。
4、分装:将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内,塞好棉塞用牛皮纸包扎好,准备灭菌。
5、灭菌:培养基的灭菌,常用高压蒸汽灭菌法。
一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死,但细菌的芽孢有较强的抗热性,需经高压蒸气灭菌才能达到彻底灭菌的目的。
根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理,即压力越大,蒸汽温度就越高。
因此,在同一温度条件下,采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。
而在湿热情况下,菌体吸收水分后,其蛋白质易于凝固变性,因为蒸汽的穿透力强,杀菌效果好。

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