上海联硕生物科技有限公司
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考马斯亮兰的测定含量
人阅读 发布时间：2022-12-15 08:58
简介
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果，如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于细胞骨架的检验。浓染液
将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50mL 95%乙醇，加入100mL 85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至1000mL，此染液放4℃至少6个月保持稳定。样本准备
尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20μg—150μg/100μL之间绘制标准曲线。溶解
将待测样本溶于100~1缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。稀释
按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。作用
每个样本加5mL稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min。计算
根据标准曲线计算待测样本的浓度。询价列表
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