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联硕新闻

血清使用时的一些注意事项,您都知道吗?

发布时间:2020-11-26 09:04 |  点击次数:

一、储存条件
血清一般储存于-20℃,同时应避免反复冻融。若存放于4℃时,请勿超过一个月。

二、血清中絮状沉淀的处理
沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白,这是正常特性,不会影响产品性质。
离心血清(400g,1-2分钟)或简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里。
大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。
一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤。

三、使用浓度
一般为5-20%,最常用是10%。过多血清容易使培养中的细胞发生变化,特别是一些二倍体的无限细胞系,迅速生长之后容易发生恶性转化。

四、解冻方法
血清从冰箱取出后应慢慢地解冻。最好在4℃低温冰箱里放置一天或直到完全融化为止。如果时间不允许低温解冻, 可参考以下解冻方法:   
1. 将血清从冰箱里取出后,在室温下放置15-20分钟。
2. 然后将血清放置在37℃水浴槽里。过高温度会导致血清出现浑浊现象。不要让水淹没装有血清的瓶子。
3. 每隔5分钟左右适当摇晃瓶子,直到完全地解冻为止。

五、热灭活方法
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞、平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。若必须做血清的热灭活,请遵守56℃30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
1. 用上述描述的方法将血清在低温冰箱或室温下解冻。
2. 在血清解冻时,将一个容器装入适量的水,用于模拟装有血清瓶子在热处理过程中检测瓶内水的温度。容器大小、质地和装水的量最好与装血清的瓶子相同或相似。
3. 待血清彻底解冻时,将含有血清的瓶子放在预热的56℃水浴里,不要将含有血清的瓶子让水淹没或接近瓶子的盖子,以免导致污染。
4. 在开始加热处理时,要及时使用温度计测定模拟瓶内水的温度。
5. 在预热期间,每隔3-5分钟要适当摇晃含有血清和水的瓶子,确保瓶内液体均匀加热。
6. 一旦模拟瓶内的水温达到55.8±0.5℃时,开始计时,并在此温度范围内热处理30分钟,然后立即放在冰上冷却
为防止在热处理过程中由蛋白质变性而导致的浑浊和沉淀现象,热处理时应注意下列事项:
1. 不要用高于25℃以上的温度加快解冻速度。
2. 在热处理之前,要使血清彻底融解。
3. 不要使热处理的温度高于56.3℃
4. 热处理时间不要长于30分钟。
5. 在加热过程中一定要定时摇动血清。

六、避免事项
1.避免反复冻融
长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。
2.避免产生沉淀
解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
血清分装时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。
勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。

七、建议事项
一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。(100U/mL青霉素;100µg/mL链霉素)


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