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透析袋的使用方法
人阅读 发布时间：2020-06-23 11:11
透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中，除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。那透析袋是怎样使用的呢？
一、透析的原理
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为「保留液」，袋（膜）外的溶液称为「渗出液」或「透析液」。
透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正比于膜的面积和温度，通常是 4℃ 透析，升高温度可加快透析速度。
二、三种不同类型的透析袋
1、普通型透析袋
（1）把透析袋剪成适当长度（10-20 cm）的小段；
（2）在大体积的 2%(W/V) 碳酸氢钠和 1 mmol/L EDTA(pH 8.0) 中将透析袋煮沸 10 分钟；
（3）用蒸馏水彻底清洗透析袋；
（4）放在 1 mmol/L EDTA(pH 8.0) 中将之煮沸 10 分钟；
（5）冷却后，存放于 4 度，必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套；
（6）用前在透析袋内装满水然后排出，将之清洗干净；
2. 再生纤维素透析袋
此类型透析袋可耐受 pH 范围是 2.0～12.0；耐受温度是 4～60℃；不能煮，也不需要煮，只需用纯水彻底冲洗即可。
3. 纤维素透析袋
此类型透析袋可耐受 pH 范围是 2.0～9.0；耐受温度是 4～37℃；不能煮，也不需要煮，只需用纯水彻底冲洗即可。
三、透析袋的选择
1. 确定透析袋的分子量
在选择适合截留分子量之前，首先要明确：欲保留在透析袋中的样品和想要除去的杂质的分子量。
2. 选择普通型，再生型，or 纤维素透析袋
确定好分子量之后，根据实际情况，样品溶剂等，选择透析袋。
3. 正确选择扁平宽度
透析袋扁平宽度的选择取决于样品体积和透析容量。较小的透析管透析更快；较大的透析管因扩散距离较长透析较慢。为易于使用，建议使用总长（包括闭合夹和顶部空间）为大约 10-15 cm 的透析袋。
四、透析袋的使用
下述透析程序是一个普遍的基础透析过程。在开始透析之前应考虑到许多变数。透析样品溶剂、膜的化学相容性、膜的截留分子量，透析溶剂、透析体积、温度等变量都会影响透析速率，因此，一些应用中下述透析过程可能需要适当的变化。
a. 把适量的透析液（缓冲液）加入透析装置。透析液的体积应为样品体积量的 100 倍（例如：在一升透析液中透析 10 毫升的样品）。
b. 裁剪适当长度的透析管。预留一段额外长度（约占总样品体积量的 20%）作为头部空间。
c. 把透析管插入打开的透析夹，在约超出透析夹 3-5 毫米的位置再夹住，不要折叠透析袋。
d. 由透析管开口端将样品装入。调整一下顶部空间的长度，夹紧透析夹。
e. 把透析样品放在合适的透析缓冲液中。
f. 透析要根据具体的应用需求。通常情况下，允许过夜透析。在持续透析的过程中，至少要进行 3 次全部更换透析液。建议在（透析后）2-4 小时，6-8 小时和 10-14 小时（第 2 天早晨）更换透析液。在然后一次透析液的更换后要至少继续进行 2 小时的透析。
五、透析袋的存储
一、透析的原理
透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为「保留液」，袋（膜）外的溶液称为「渗出液」或「透析液」。
透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正比于膜的面积和温度，通常是 4℃ 透析，升高温度可加快透析速度。
二、三种不同类型的透析袋
1、普通型透析袋
（1）把透析袋剪成适当长度（10-20 cm）的小段；
（2）在大体积的 2%(W/V) 碳酸氢钠和 1 mmol/L EDTA(pH 8.0) 中将透析袋煮沸 10 分钟；
（3）用蒸馏水彻底清洗透析袋；
（4）放在 1 mmol/L EDTA(pH 8.0) 中将之煮沸 10 分钟；
（5）冷却后，存放于 4 度，必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套；
（6）用前在透析袋内装满水然后排出，将之清洗干净；
2. 再生纤维素透析袋
此类型透析袋可耐受 pH 范围是 2.0～12.0；耐受温度是 4～60℃；不能煮，也不需要煮，只需用纯水彻底冲洗即可。
3. 纤维素透析袋
此类型透析袋可耐受 pH 范围是 2.0～9.0；耐受温度是 4～37℃；不能煮，也不需要煮，只需用纯水彻底冲洗即可。
三、透析袋的选择
1. 确定透析袋的分子量
在选择适合截留分子量之前，首先要明确：欲保留在透析袋中的样品和想要除去的杂质的分子量。
2. 选择普通型，再生型，or 纤维素透析袋
确定好分子量之后，根据实际情况，样品溶剂等，选择透析袋。
3. 正确选择扁平宽度
透析袋扁平宽度的选择取决于样品体积和透析容量。较小的透析管透析更快；较大的透析管因扩散距离较长透析较慢。为易于使用，建议使用总长（包括闭合夹和顶部空间）为大约 10-15 cm 的透析袋。
四、透析袋的使用
下述透析程序是一个普遍的基础透析过程。在开始透析之前应考虑到许多变数。透析样品溶剂、膜的化学相容性、膜的截留分子量，透析溶剂、透析体积、温度等变量都会影响透析速率，因此，一些应用中下述透析过程可能需要适当的变化。
a. 把适量的透析液（缓冲液）加入透析装置。透析液的体积应为样品体积量的 100 倍（例如：在一升透析液中透析 10 毫升的样品）。
b. 裁剪适当长度的透析管。预留一段额外长度（约占总样品体积量的 20%）作为头部空间。
c. 把透析管插入打开的透析夹，在约超出透析夹 3-5 毫米的位置再夹住，不要折叠透析袋。
d. 由透析管开口端将样品装入。调整一下顶部空间的长度，夹紧透析夹。
e. 把透析样品放在合适的透析缓冲液中。
f. 透析要根据具体的应用需求。通常情况下，允许过夜透析。在持续透析的过程中，至少要进行 3 次全部更换透析液。建议在（透析后）2-4 小时，6-8 小时和 10-14 小时（第 2 天早晨）更换透析液。在然后一次透析液的更换后要至少继续进行 2 小时的透析。
五、透析袋的存储
a. 透析袋不能在纯水中长期储存，会长菌，用 0.05%die 氮化钠溶液储存。
b. 样品按推荐的单位长度容量加样，不可多加，样品浓度不可太大，否则容易导致膜涨破。
c. 样品和透析液体积比一般是 1:50～500。
d. 对于高浓度污染物，样品可能需要较长的时间透析，透析液需要更频繁的更换。
e. 透析温度主要取决于样品。温度限制主要取决于膜的类型。纤维素透析袋可以承受的温度高达 37℃，再生纤维素透析袋可以承受的温度高达 60℃。
六、使用注意事项
在适当的储存情条件下，保质期为两年。干燥的透析袋要在室温或 4℃ 储存在聚 yi 烯袋中。一旦变湿，透析袋应浸泡在下列之一的溶液中：0.05%die 氮化钠，1% 苯 jia 酸钠或 1% 甲醛。（备注：一旦变潮湿，不要让透析袋干燥。不断干燥会造成孔隙结构不可恢复的倒塌）
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