上海联硕生物科技有限公司

https://biolzy.biomart.cn

公众号

扫一扫
进入手机商铺

公众号

微信扫一扫
关注公众号

产品分类
联硕图片
联硕地址
 公司地址
上海市青浦区嘉松中路3555号A1栋
邮编:
 联系电话
400-****-500登录查看商家电话
 传真号码
021-65677533
 电子邮箱
lianshuo@****126.com登录查看商家邮箱
 公司网址
点击这里给我发消息
联硕新闻

透析袋的使用方法

发布时间:2020-06-23 11:11 |  点击次数:

透析已成为生物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中,除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。那透析袋是怎样使用的呢?

一、透析的原理 

透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状,将生物大分子样品溶液置入袋内,将此透析袋浸入水或缓冲液中,样品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋内,而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外,直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为「保留液」,袋(膜)外的溶液称为「渗出液」或「透析液」。

透析的动力是扩散压,扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度,还正比于膜的面积和温度,通常是 4℃ 透析,升高温度可加快透析速度。 


二、三种不同类型的透析袋 

1、普通型透析袋
(1)把透析袋剪成适当长度(10-20 cm)的小段;
(2)在大体积的 2%(W/V) 碳酸氢钠和  1 mmol/L EDTA(pH 8.0) 中将透析袋煮沸 10 分钟;
(3)用蒸馏水彻底清洗透析袋;
(4)放在  1 mmol/L EDTA(pH 8.0) 中将之煮沸 10 分钟;
(5)冷却后,存放于 4 度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套;
(6)用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净;

2.  再生纤维素透析袋
此类型透析袋可耐受 pH 范围是 2.0~12.0;耐受温度是 4~60℃;不能煮,也不需要煮,只需用纯水彻底冲洗即可。

3. 纤维素透析袋
此类型透析袋可耐受 pH 范围是 2.0~9.0;耐受温度是 4~37℃;不能煮,也不需要煮,只需用纯水彻底冲洗即可。


三、透析袋的选择

1. 确定透析袋的分子量 
在选择适合截留分子量之前,首先要明确:欲保留在透析袋中的样品和想要除去的杂质的分子量。

2. 选择普通型,再生型,or 纤维素透析袋 
确定好分子量之后,根据实际情况,样品溶剂等,选择透析袋。

3. 正确选择扁平宽度 
透析袋扁平宽度的选择取决于样品体积和透析容量。较小的透析管透析更快;较大的透析管因扩散距离较长透析较慢。为易于使用,建议使用总长(包括闭合夹和顶部空间)为大约 10-15 cm 的透析袋。 


四、透析袋的使用 

下述透析程序是一个普遍的基础透析过程。在开始透析之前应考虑到许多变数。透析样品溶剂、膜的化学相容性、膜的截留分子量,透析溶剂、透析体积、温度等变量都会影响透析速率,因此,一些应用中下述透析过程可能需要适当的变化。

a. 把适量的透析液(缓冲液)加入透析装置。透析液的体积应为样品体积量的 100 倍(例如:在一升透析液中透析 10 毫升的样品)。
b. 裁剪适当长度的透析管。预留一段额外长度(约占总样品体积量的 20%)作为头部空间。
c. 把透析管插入打开的透析夹,在约超出透析夹 3-5 毫米的位置再夹住,不要折叠透析袋。
d. 由透析管开口端将样品装入。调整一下顶部空间的长度,夹紧透析夹。
e. 把透析样品放在合适的透析缓冲液中。
f. 透析要根据具体的应用需求。通常情况下,允许过夜透析。在持续透析的过程中,至少要进行 3 次全部更换透析液。建议在(透析后)2-4 小时,6-8 小时和 10-14 小时(第 2 天早晨)更换透析液。在然后一次透析液的更换后要至少继续进行 2 小时的透析。


五、透析袋的存储

 
a. 透析袋不能在纯水中长期储存,会长菌,用 0.05%die 氮化钠溶液储存。
b. 样品按推荐的单位长度容量加样,不可多加,样品浓度不可太大,否则容易导致膜涨破。
c. 样品和透析液体积比一般是 1:50~500。
d. 对于高浓度污染物,样品可能需要较长的时间透析,透析液需要更频繁的更换。
e. 透析温度主要取决于样品。温度限制主要取决于膜的类型。纤维素透析袋可以承受的温度高达 37℃,再生纤维素透析袋可以承受的温度高达 60℃。

六、使用注意事项 

在适当的储存情条件下,保质期为两年。干燥的透析袋要在室温或 4℃ 储存在聚 yi 烯袋中。一旦变湿,透析袋应浸泡在下列之一的溶液中:0.05%die 氮化钠,1% 苯 jia 酸钠或 1% 甲醛。(备注:一旦变潮湿,不要让透析袋干燥。不断干燥会造成孔隙结构不可恢复的倒塌)