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联硕新闻

关于细胞样的保存

发布时间:2020-06-12 13:22 |  点击次数:

一、操作步骤:

 

1、在37℃ 5% CO2条件下将细胞加在处理的载玻片上,用培育基培育,时间通过预试验确定;

 

2、细胞长好后,用洗刷液洗2分钟×3次,室温下将其放入细胞固定液中固定30-60min,蒸馏水洗刷;

 

3、室温下用洗刷液充沛洗刷固定细胞,(干燥后-20℃冰冻保存2周以上)

 

4、杂交前将固定的细胞进行如下处理;顺次在70%,90%,100%的乙醇中浸泡,脱水每次
5min,用二jia苯洗刷,除掉残留脂质顺次在100%,90%,70%乙醇中浸泡,进行再水化,每次5min,后浸泡于洗刷液中;

 

5、在37℃用胃蛋白酶溶液10min处理固定的细胞,以增加细胞对大分子试剂的通透性,再用洗刷液洗5min;

6、用1%甲醛固定10min,用洗刷液洗净。

 

二、留意:

   
1、所有溶液都必须用RNA酶抑制剂处理。
    

2、操作中重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。